单位文秘网 2021-08-10 08:10:08 点击: 次
摘要:目的:通过样品的分离鉴定过程进行分析,总结经验。方法:按指导书要求,根据标准GB4789.4 2010和GB4789.5 2012,仪器为ATB。结果:成功分离出目标菌沙门氏菌和志贺氏菌,鉴定出干扰菌致泻大肠埃希氏菌。结论:同时分离鉴定3种菌株,可以直观地对比出3种菌株在不同的培养基中的菌落形态,以及如何准确有效地鉴定目标菌,是一个很好的经验积累,并顺利完成此次能力验证。
关键词:能力验证;沙门氏菌;志贺氏菌;大肠埃希氏菌 文献标识码:A 中图分类号:TS201
文章编号:2096-4137(2018)10-022-03 DOI:10.13535/j.cnki.10-1507/n.2018.10.07
沙門氏菌(Salmonella spp.)、志贺氏菌(Shigella)、致泻大肠埃希氏菌均为肠道致病菌,革兰氏阴性杆菌。沙门氏菌有2489个不同的血清型;志贺氏菌主要有福氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、宋内氏志贺氏菌;致泻大肠埃细菌中公认的致病菌有6种,而在实际检测过程中,按标准要求,只需要符合相关典型的生化特性以及多价血清凝集反应鉴定到属,就可以判断为检出或未检出。本文根据笔者多年的微生物检测经验,通过总结本次能力验证分离鉴定过程,积累经验,以提高检测能力水平。
1 材料和方法
1.1 试验材料
1.1.1 待测样品
食品中沙门氏菌和志贺氏菌能力验证样品,编码为110-1~110-4共4个样品,为乳白色块状固体物,西林瓶真空密闭包装,由广东省疾病预防控制中心提供。
1.1.2 培养基及试剂
一次性成品培养基-缓冲蛋白胨水(BPW)、四硫酸钠煌绿增菌液(TTB)、亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)、XLD 琼脂平板、沙门氏菌生化鉴定盒、志贺氏菌生化鉴定盒、营养琼脂(NA)、沙门氏菌显色培养基(SA)、志贺氏菌显色培养基,商品粉末培养基-亚硫酸铋琼脂(BS)、志贺氏增菌肉汤沙门氏菌属多价诊断血清(O,H1,H2,H3,H4)、志贺菌属多价诊断血清(泰国)、厌氧包(日本)均购自广东环凯微生物有限公司;ATB全自动微生物鉴定系统配套试剂条(ID32E)为生物梅里埃产品。
1.1.3 主要仪器
ClassⅡBSC生物安全柜(新加坡 ESCO)、生化培养箱(迅搏科技)、高压灭菌锅(迅搏科技)ClassⅡBSC生物安全柜(新加坡ESCO)、生物显微镜(奥林巴斯Olympus ZEISS)、ATB全自动微生物鉴定/药敏分析系统(法国生物梅里埃公司)、移液器(德国EPPENDORF)。
1.1.4 标准菌株
伤寒沙门氏菌,福氏志贺氏菌。
2.2 检测方法
2.2.1 样品处理
按照作业指导书,无菌打开真空冻干管,用4ml1营养肉汤充分溶解转移冻干管的内容物作为待测溶液为样品。按照GB4789.4-2010 食品国家安全标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验和GB4789.5-2012食品国家安全标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验,及后来分离出的大肠埃希氏菌用到的标准GB 4789.38-2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数内的生化鉴定。沙门氏菌与志贺氏菌标准菌株按实验步骤同步进行,并且做空白对照
1.2.2 增菌
(1)前增菌。每个样品各吸1ml至9ml增菌液中,沙门氏菌检验用缓冲蛋白胨水BPW,混匀后36℃±1℃培养18h,志贺氏菌检测用志贺氏增菌肉汤,混浑后于41.5℃±1℃厌氧培养18h。为了确保检测的准确性,每个样品做2个平行样进行检测。
(2)选择性增菌。沙门氏菌检测有需要选择性增菌,轻轻摇动培养过的样品混合物,无菌移取1mL,转钟与成品培养基TTB内42℃±1℃培养24h;同时另取1mL,转钟于成品培养基SC内,36℃±1℃培养24h。
1.2.3 分离培养
沙门氏菌检验,每个增菌液接种XLD、BS、科马嘉显色培养基,36℃±1℃培养24~48h;志贺氏菌检验,每个增菌液接种XLD、麦康凯、志贺氏菌显色培养基,36℃±1℃培养24~48h。
增菌分离培养情况见表1。
1.2.4 生化鉴定和血清凝集实验
分别用环凯的沙门氏菌生化鉴定盒和志贺氏菌生化鉴定盒,以及梅里埃的ATB生化试剂条ID32E对可疑菌落进行生化鉴定鉴定。
沙门氏菌检测的生化鉴定,可疑的菌落为101-1,ATB检测结果为沙门氏菌属,伤寒沙门氏菌血清凝集试验O、H1凝集,101-1血清凝集试验O、H2凝集。志贺氏菌检验生化鉴定,可疑的菌落为101-3,其生化鉴定结果及血清凝集试验结果见表2,ATB检测结为志贺菌属,福氏志贺氏菌和101-3志贺多价血清凝集。对分离出的非目标菌生化鉴定见表2,ATB检测结果为致泻大肠埃希菌。
生化鉴定情况见表2。
2 结果与分析
2.1 分离培养
48h通过志贺氏菌检测分离出的菌落形态,就可以初步判断,1号样品是典型的沙门氏菌,2号样品是空白,3号样品是沙门氏菌,4号样品是大肠埃希氏菌。
2.2 判定
由表1和表2就可以得出结论。检测结果为110-1检出沙门氏菌,110-2无菌,110-3检出志贺氏菌,110-4检出大肠埃希氏菌。结论与能力验证预设一致,结果评价为满意。
3 讨论
(1)本次能力验证目标菌种2个,干扰菌1个,均为1个样品1个菌株,没有混合样品,在分离鉴定的过程中相对独立,没有干扰性,不存在因增菌时间过长使目标菌被优势菌覆盖的可能性。
(2)本次能力验证的菌株为具有典型性状的标准菌株,实验室可留作工作菌株使用。
(3)本次能力验证证明,一个样品在不同的检测中都能分离出相同的目标菌,因此在日常的检测工作中,沙门氏菌检测与志贺氏菌检测可相互验证。
(4)本次选择的沙门氏菌标准菌株与目标菌株不同,因此依据标准来判断。
参考文献
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(责任编辑:陈玉荣)
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