单位文秘网 2021-07-10 08:11:17 点击: 次
工业化要求。
关键词: β-甘露聚糖酶; 巴斯德毕赤酵母; 高密度培养; 发酵优化
中图分类号:Q815 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2015)23-5978-06
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.23.047
Optimization Technology of β-Mannanase Fermented by Pichia pastoris
ZHANG Xiao-long,XIAO Jing,WANG Rui-ming
(Institute of Biological Engineering of Qilu University of Technology, Shandong Province Key Laboratory of Microbial Engineering,
Jinan 250353,China)
Abstract:The fermentation conditions of genetically engineered Pichia pastoris for β-Mannanase were studied. Basic conditions of the carbon source, immunization rates, temperature, pH were optimized in shake-flask. The tests in 30 L fermenter was applied to study the effects of DCW,methanol concentration and DO on enzyme production. Through the orthogonal design to optimize the fermentation conditions. The results indicated that the optimum conditions were as follows:10% inoculum size,30 g/L initial glucose concentration, 10%~20% DO,pH 5.0 at 28 ℃. The dry cell weight was 135 g/L,the target protein concentration could reach to 5.04 g/L. And the β-Mannanase activity got to be 29 600 U/mL,which was 24 times of that the results in the shake flask under these conditions.
Key words:β-Mannanase;Pichia pastoris;high cell density culture;fermentation optimization
β-甘露聚糖酶(β-1,4-D-mannan mannohydrolase,EC 3.2.1.78)是β-1,4甘露聚糖甘露糖苷水解酶的简称,属于半纤维素酶类,广泛应用于食品、饲料、医药、纺织印染等方面[1],在饲用酶制剂应用方面尤其重要[2],添加β-甘露聚糖酶可以降解饲料中含有的β-甘露聚糖,有助于消除甘露聚糖对机体胰岛素分泌和胰岛素样生长因子(IGF)生成的抑制作用,提高葡萄糖吸收速率,促进碳水化合物代谢过程,提高日粮能量利用率,是一种良好的饲料添加剂,也是抗生素的理想代替品[3]。
毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统既具有原核表达系统易于培养、繁殖快速、表达量高的优点,又具有真核表达系统外源蛋白翻译后再加工修饰等特点,目前已有超过500种外源蛋白在毕赤酵母中获得成功表达。山东省微生物重点实验室成功构建一株表达枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶基因毕赤酵母工程菌,在前期工作的基础上,本试验通过优化毕赤酵母工程发酵最适pH、温度、碳源浓度、接种量等基础条件,以及选取在大规模工业化生产中的重要因素甲醇补料方式、甲醇浓度、菌体浓度、DO值等,进行毕赤酵母高密度培养表达β-甘露聚糖酶的工艺优化,获得较为成熟的工艺,使酶活力达到工业化生产要求。
1 材料与方法
1.1 菌种
β-甘露聚糖酶毕赤酵母工程菌:山东省微生物重点实验室构建、保存[4]。
1.2 仪器设备
30 L发酵罐为上海国强生化装备有限责任公司生产,配备温度、溶氧、pH电极、压缩空气、氨气、冷却水以及蒸汽系统。
1.3 培养基
种子培养基(YPD):20 g/L葡萄糖、20 g/L蛋白胨、10 g/L酵母提取物。
发酵基础培养基:2.5%葡萄糖、5 g/L KH2PO4、3 g/L CaSO4、15 g/L K2SO4、15 g/L MgSO4、35 g/L NH4H2PO4、4.2 g/L KOH、12 g/L微量元素。
(责任编辑:单位文秘网) )地址:https://www.kgf8887.com/show-124-63176-1.html
上一篇:科研院所引才聚才用才新机制研究
下一篇:构建酿酒酵母细胞工厂生产番茄红素
版权声明:
本站由单位文秘网原创策划制作,欢迎订阅或转载,但请注明出处。违者必究。单位文秘网独家运营 版权所有 未经许可不得转载使用