单位文秘网 2021-08-18 08:57:31 点击: 次
摘要在食品安全越来越受到人们关注的情况下,食品微生物的检测显得尤为重要。为此,人们不断地尝试研制和改进检测设备,研究和创新检测技术,以求快速准确地检测食品中的微生物含量。列举了一些检测方法,并评定了它们的特点。
关键词食品微生物;检测方法;快速;自动化
多年以来,对食品微生物的检测,通常采用琼脂平板培养法,共需2~3d才能完成[1]。这种依靠培养基进行培养、分离及生化鉴定的传统方法,既费时费力,又繁杂。为了能快速、方便、正确地检验食品微生物,近几年来,许多国家对此进行了研究,并取得了进展。快速检测及其自动化则是通过综合引用微生物学、化学、生物化学、生物物理学、免疫学以及血清学试验技术对微生物进行分离、检测、鉴定和计数,与传统方法比较,更快、更方便、更灵敏[2]。
1重量分析稀释计
重量分析稀释计是一种新仪器,能准确自动地制备样品稀释液,如当仪器指定的样品稀释比率为1:10时,它会自动吸取9份灭菌生理盐水和l份被检样品到同一容器中。大量实验表明,结果的准确性在90%~100%之间。该仪器的稀释比率可在1∶1~1∶100之间任意调节。这种仪器消除了稀释和称量过程中的误差,节省时间,并省去了一些计算[3]。
2旋转平板技术和激光菌落扫描仪
自动旋转平板技术是在琼脂培养基表面倒一薄层样品,该仪器可使液体样品以螺旋转动方式分布,液体慢速流出后,随着平板的旋转从中心向边缘分布,样品分布非常均匀。这种方法可广泛用于细菌、酵母、霉菌及乳类样品中。样品倒入平板后,菌落数可以用激光菌落计数器来计数,即将光检测仪放置在仪器的底部,激光仪从上面自动扫描平板,当激光束通过菌落时,可以降低光的强度,从而检测出菌落的存在。这样菌落数可以通过电子计数,从而不是传统的视觉计数。电子计数快而准确,与传统计数法得到的结果相近[3]。
3“干片”法
“干片”法是利用无毒的高分子材料做培养基载体,快速、定性和定量检测试纸和胶片的食品微生物检测方法,集现代化学、高分子科学、微生物学于一体,已经达到作为定量常规法的水平。对有些项目的测定,几乎可与标准方法相媲美。如在欧美各国倍受青睐的“Petrimm”就是如此。由于其准确度和精确度高,可测定少量检品,不需要配制试剂,操作简便快速,易于消毒保存,便于运输,携带方便,价格低廉,可随时进行;加之除“干片”外无其他任何废液废物,大大减少或消除对环境的污染,故适用于实验室、生产现场和野外环境工作,可以使防疫工作人员随时取样检查,减轻劳动强度,提高检验质量[4]。
4螺旋接种法
这种检验法的检测器是由培养基的杀菌、分装、称量稀释、定量涂抹聚计、数据处理机等部分构成。操作时,用接种笔涂抹平板培养基的表面,将液体样品依次设定螺旋般散布一定的面积,控制每一部分的液体量,在接种后放入
恒温箱内培养,用激光计数器计算生菌数。目前,美国食品药物管理局已批准此种生菌检验法[1]。
5电阻电导测定法
这种检验法的原理是:当细菌生长繁殖时,将蛋白质、糖类等大分子物质分解成氨基酸、有机酸等带电荷的小分子物质,改变培养液的导电度。这样,测量电阻和导电度的变化,就可推算出样品原来的含菌数。已开发出来的电阻电导检测器有:美国Vitek公司生产的Bactometer。可适用于检测牛乳、乳制品、肉品等含菌量;英国推出的Mathus系统,可用来检测牛乳、酿造液、鱼及海产品的含菌量[1,5]。
6多聚酶链式反应PCR
PCR技术是由Kleppe等人在1971年首先提出的。该方法通过对人工难以培养的微生物相应DNA片段的扩增,检测扩增产物含量,从而快速地对食品中致病菌含量进行检测。检测时,首先在高温下(95℃)使得蛋白质变性,DNA双链变成单链;再迅速降温(55℃),每条DNA单链退火,这就是所谓的热循环。之后温度重新上升到95℃,开始新的循环。经一套扩增循环(21到31次)将1个单分子DNA扩增到107分子。整个过程可以在1h内通过自动热量循环器完成。理论上,只要样品中含有一分子沙门氏菌的DNA,通过PCR技术完全可以在短时间内检测到。这种测定方法的优点是测定结果迅速、灵敏度和特异性高、检测成本低;但其存在的最大问题在于PCR产品的污染[6,7]。
7酶联免疫法ELISA
抗原—抗体反应法是测定特异性致病菌及其产生毒素最常用的方法。ELISA是利用抗原和抗体之间的反应,在临床医学领域的许多方面都有应用。抗体在抗血清中可以是单克隆抗体,也可以是多克隆抗体。检测时首先将抗体吸附到固体载体上,然后再加富集培养物,使抗体将样品中所有目的抗原结合到固体载体上。实际中常使用一种夹心模式,在该模式中,先将第二个酶标抗体加入样品中,然后加入一种能与第二个酶标抗体发生阳性颜色反应的反应底物。如果样品中没有目的抗原,酶标抗体就无法结合,也就不会发生颜色反应;反之就可以认为该样品呈阳性[1,6,8]。
8ATP(即腺苷三磷酸)检验法
此检验法不需用培养基,只需将ATP检验仪与计算机连接后,就能处理数据,即时显示检验结果。其原理是:所有的生物体中都含有能够传达能量的ATP,检验ATP就可知道细菌数量及活性。而在微生物中,所含ATP量很少。如在萤光酶、萤光物质与氧及镁离子存在的条件下,其光量与样品中ATP量成正比,凭此光量,来检验食品中的微生物量。如美国可口可乐公司与日本MilliPor公司共同开发了用ATP检测饮料的新设备,将检测时间缩短为5~6 min[1]。
9基因探针法
基因探针是能识别特异碱基序列(基因)的一段单链DNA或RNA分子。经标记了的基因探针与靶细胞杂交后能用特定的方法进行检测[8]。
食品微生物快速检测法在国外发展非常迅速、普遍,而在国内应用较少。希望通过介绍这些较新的方法,能够对食品微生物工作者有所启示,对国内食品微生物检验方法一成不变的局面有所改观,使食品微生物的检验结果对食品生产更有指导意义。
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