单位文秘网 2021-08-10 08:15:35 点击: 次
组织的实验室能力验证活动,检验项目是“调料粉中金黄色葡萄球菌定量检验”。最终的验证结果为“满意”,但数据结果偏低。为分析数据偏低的原因,总结经验,现将实验过程进行回顾分析。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
(1)材料。调料粉基质1瓶(25.0 g,编码:CODE-10)、白色菌球1瓶(1粒装,编码:CODE-10),将两种样品均置于-20 ℃冷柜中暂存。
(2)仪器。BSC-1500ⅡA2-X生物安全柜:济南鑫贝西生物技术有限公司生产;BAJMIXYR400CC拍打式均质器,法国interscience生产;HWS-150B恒温恒湿培养箱:天津泰斯特仪器有限公司。
1.2 实验前准备
(1)准备实验环境。①使用紫外线灯和移动臭氧消毒机对微生物实验室整体环境灭菌40 min。②对实验室洁净度进行监测,确保达到实验要求。③对相关仪器设备及试剂进行检查,确保正常使用。
(2)拟定实验计划。计划做8个稀释梯度
(10-1~10-8),每个梯度做4组平行。
(3)准备试剂及相关物品。磷酸盐缓冲液225 mL,BP平板(Φ9 cm)96个,9 mL磷酸盐稀释管8支,带滤膜均质袋1个,L型涂布棒若干。
1.3 实验过程
实验严格按照国家标准GB 4789.10-2016 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》进行,生物安全事项参考国家标准GB 19489-2008生物安全通用要求。操作步骤:①菌丸复苏。实验前将待检样品从-20 ℃冰柜中取出,置于室温复苏1 h。②样品前处理。在生物安全柜内将225 mL磷酸盐稀释液和菌球加入均质袋中,让菌球充分溶解,然后将调料粉全部加入均质袋中,在均质机上均质2 min充分混匀。③制作样品匀液。从过滤的菌液中准确吸取样液1 mL,分别制成10-1~10-8稀释度的样品匀液,每个稀释度均制作4组进行平行对照。④样品接种。用移液枪分别吸取0.3、0.3、0.4 mL各稀释度的样品匀液,加入相应的BP平板,用L型无菌涂布棒小心均匀地涂布整个平板,同时避免涂布到平板边缘。⑤培养过程。将涂布完成的BP平板置于37 ℃培养箱进行培养。培养时先静置1 h等待样品液完全吸收,然后翻转倒置培养,48 h后观察结果。
2 结果与分析
2.1 典型菌落计数和确认
从所有稀释度的BP平板中选择可疑典型菌落在适宜计数范围内的3个平板。选择计数,10-3稀释度的BP平板符合计数条件,其典型可疑菌落合計64个。从中挑选出5个典型菌落分别接种于BHI中培养24 h,然后再分别接种冻干兔血浆进行观察,同时在血平板和金黄色葡萄球菌显色培养基上划线培养24 h。兔血浆、血平板和金显观察情况表见表1。
根据国家标准GB 4789.10-2016 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》9.1项,本次实验中10-3稀释度平板上的典型菌落为64个。
(1)式(1)中,T-样品中金黄色葡萄球菌菌落数;
A-某一稀释度典型菌落的总数;B-某一稀释度鉴定为阳性的菌落数;C-某一稀释度用于鉴定试验的菌落数;d-稀释因子。
能力验证结果的最终通报数据范围:4.0×104~1.6×105 CFU·g-1,本实验室上报结果为5.1×104 CFU·g-1,验证结果满意,但数据偏低。
2.2 数据偏低的原因分析
组织实验人员对数据偏低的原因进行了认真查找和深入分析。认为造成数据偏低的原因可能有以下几个方面:①样液未充分混匀。样液均质的时间偏短,没有充分混匀。②实验前未校准移液枪。因移液枪使用时间较久,准确度可能下降。在实验前应再次进行校准,以保证取样量的准确。③平皿薄厚不均。生物安全柜表面水平度不够,制作的平皿会出现一边薄一边厚的现象,样液在平皿上会流向低的一边以致流入平皿边缘缝隙,影响计数。④培养基干燥程度不够。培养基是否干燥会直接影响样液吸收。因此,应等平皿充分干燥后再加入样液进行涂布,使样液快速吸收,避免流动。⑤培养基面积偏小。本实验中使用的是直径9 cm的平皿,涂布时很容易将样液涂布到平皿边缘缝隙中,从而影响计数。如果使用直径更大的平皿,这一问题则可能会得到妥善解决。
3 结语
参加实验室能力验证对于实验室的发展有着非常明显的促进作用。每个实验室都应当积极参加能力验证活动,以提升自身的质量管理和能力水平。对于食品中微生物检验的能力验证来说,往往是细节决定成败。因此,在开展实验前一定要认真制定实验计划,充分准备实验环境,提前验证所需试剂及仪器设备,预判实验各环节中可能出现的问题。只有不断总结经验,才能在每一次的能力验证中取得好的成绩。
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