单位文秘网 2021-08-12 08:09:07 点击: 次
摘 要:在食品微生物检验过程中,影响检验结果准确性的因素有很多,其中培养基的质量起着决定性作用。本文从培养基的采购、验收、配制、灭菌及存储等各个方面展开探讨,提出各环节的质量控制要点,为加强培养基的质量控制提供参考依据,保证检验结果的准确性。
关键词:食品微生物检验;培养基;质量控制
随着科学技术的高速进步与发展,涌现出了许多微生物检验新技术,如分子生物学、免疫学的新技术及自动化仪器分析法等,使微生物的检验周期有效缩减,检验效率及准确性也大大提升[1]。然而微生物的分离、鉴定、保存等操作仍离不开培养基。培养基是指液体、半固体或固体形式的、含天然或合成成分的,用于保证微生物繁殖、鉴定或保持其活力(含或不含某类微生物的抑菌剂)的物质[2]。培养基自身质量的优劣、产品性能是否符合规定、配制与使用方法是否正确、存储是否得当都直接关系着检验结果的可靠性与准确性[3]。本文着眼于食品微生物检验所用培养基的质量控制,从采购、验收、配制、灭菌及存储等方面对培养基的质量控制方法进行阐述。
1 培养基的采购
目前,食品微生物检验普遍使用方便又快捷的商业化合成培养基,这有效避免了实验人员因全手工制备过程中易产生的偏差。然而,各生产商的培养基质量有一定差异,实验室应采购通过了质量管理体系认证、市场信誉度高、国内外知名度高且有质量保证能力的厂商的产品[4]。
2 培养基的验收
2.1 初步验收
新购置的培养基到货后应由相关人员做好验收工作。培养基收货人员首先需仔细审核并记录培养基的名称、批号、有效期及产品包装完整性等产品信息,并记录培养基的数量、接收日期等,做好登记入库工作。此外,应向生产厂商索要含有理化指标和微生物性能测试指标的质检报告。
2.2 理化指标及微生物性能指标测试
培养基在投入使用前需依据培養基的制控标准——食品安全国家标准GB 4789.28-2013《食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》进行相应理化指标及培养基微生物性能指标的测试。
2.2.1 理化指标测试
培养基的理化指标包括pH、颜色、澄清度及凝胶稳定性等,一般由生产商通过对培养基制备用原材料、生产过程、生产工艺等的把控进行控制。实验人员使用前需仔细检查培养基颗粒或粉末的外观、色泽及溶解后的澄清度、pH值及固体培养基的凝固情况等是否与厂商提供的质检报告相符,以判断培养基是否符合实验要求。
2.2.2 微生物性能指标测试
培养基性能指标包括生长率、选择性和特异性,其中生长率用来指示培养基对目标菌的促生长能力,目标菌在培养基上的生长率需达到标准规定的最低限值;选择性是指培养基对非目标菌的抑制能力,选择性培养基的选择性需达到标准要求限值;特异性则用来测试培养基的指示能力,质控菌株在培养基上生长的菌落形态应符合相应特征[5]。GB4789.28-2013提供了3种质控方式,包括定量法、半定量法及定性法,实验室使用的商品化培养基和试剂的质量控制,通常选择半定量法和定性法,检验人员应按该标准附录E《实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制标准》要求对培养基进行性能测试。
3 培养基的配制
3.1 一般要求
正确配制培养基是确保微生物检验成功的前提条件,要严格按照培养基处方或说明书的规定准确配制,并做好配制记录,记录应包括培养基名称、批号、生产商、配制量、灭菌条件、pH、配制日期及配制人等信息,以便溯源。
3.2 实验用水
培养基的配制用水要求pH值在5.5~7.5,在25 ℃时电导率应不超过25 μS/cm(相当于电阻率≥0.4 MΩcm),另有规定要求的除外。并且,水的菌落总数不应超过103 CFU/mL,应定期按GB 4789.2-2016,采用平板计数法进行菌落总数测定,以检查实验用水的微生物污染情况。一般使用蒸馏水或三级水。
3.3 称量、溶解和分装
为防止培养基受潮,称量时应在湿度较低的房间内进行。称量时应使用相应感量的天平按配方准确称取需要的量,并使用专业的匙,防止交叉污染。推荐使用玻璃容器盛装培养基,不建议使用铜铁制品的容器,因铜铁制品在使用时会释放影响培养基pH的金属离子,从而影响微生物的生长。溶解时,先加入适量的水充分混合,避免培养基黏底,后加水至所需的量,适当加热,并重复或连续搅拌使其快速分散,必要时应完全溶解。对于含琼脂的培养基,在加热前应浸泡几分钟。将配好的培养基分装到合适的容器中,容器的体积应至少比培养基的体积大1/5。
4 灭菌
培养基的灭菌是保证培养基质量的关键步骤,灭菌方法有干热灭菌和湿热灭菌两种,因湿热的穿透力较大,故湿热灭菌法的灭菌效力比干热法强[6]。
灭菌应在不损害培养有效成分的条件下确保灭菌效果,一般采用121 ℃灭菌15~20 min。配制好的培养基应按说明书规定的条件进行灭菌。为验证灭菌效果,每次灭菌时需用嗜热芽孢杆菌等生物监测管或压力蒸汽灭菌化学指示卡对灭菌效果进行监测。须指出的是,有些培养基无需经过高压灭菌,如VRBA、BS、SC等,只需加热煮沸溶解即可,过度加热会降低其选择性。
5 培养基的存储
干粉培养基需闭光存放于阴凉干燥处,使用后应及时拧紧瓶盖,以免吸潮、氧化或污染,发生结块的培养基不可继续使用。灭菌后的培养基,为不影响其营养成分及选择性,应及时冷却至所需温度,不可长时间保存在灭菌锅内。培养基应尽可能在保存期内能使用完。为防止培养基成分发生改变,当天未使用完的琼脂平板,应于2~8 ℃的冰箱中闭光、密封保存,并在平板上做好标记,标记内容包括名称、制备日期、制备人等,平板存储时间一般不超过2~4周。瓶装及试管装培养基一般不超过3~6个月。
6 结语
微生物检验是食品安全监测工作中极其重要的组成部分,培养基质量的优劣对于微生物的培养、分离、鉴定影响巨大,关系着检验结果的准确性及可靠性。因此,食品微生物实验室应从培养基的采购、验收、配制、灭菌及存储等各个环节入手,加强培养基的质量控制,确保为食品微生物的检验提供质量可靠的培养基。
参考文献
[1]杨云斌,杜斐颖,牛涛.食品中微生物检验用培养基的使用及质量控制探讨[J].食品安全质量检测学报,2018,5(9):1055-1058.
[2]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会. GB 4789.28-2013食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求[S].北京:中国标准出版社,2014.
[3]许阳.论食品微生物检验中培养基的质量控制[J].疾病监测与控制杂志,2015,5(9):331-332.
[4]李芬.食品卫生微生物检验中培养基的质量控制[J].世界最新医学信息文摘,2018,18(89):161,164.
[5]孙葳,王超,赵虹.浅谈食品微生物检验中培养基质量控制[J].食品安全导刊,2018,33(89):115.
[6]赵永群.食品卫生微生物检验中培养基的质量控制[J].当代医学,2012,32(18):155.
作者简介:魏金梅(1989—),女,汉族,江西赣州人,硕士,生物科检验员。研究方向:食品药品检验检测。
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