单位文秘网 2021-07-10 08:21:16 点击: 次
组织种植于左侧腹壁,术后进行组织形态学观察,并对异位病灶进行MRI扫描。结果:模型成功,异位病灶在DWI图像上呈明显的亮高信号,T1WI图像上呈低信号,T2WI图像上呈高信号,边界清楚,CE-T1WI图像上内部无增强。结论:此方法建立的大鼠子宫内膜异位症模型在MRI图像上可以清晰地观察到病灶部位,便于反复实验及连续性观察研究。
[关键词]子宫内膜异位症模型;MRI
子宫内膜异位症(EMs)是一种激素依赖性的良性病变,是妇女常见病、多发病[1]。磁共振成像(MRI)作为一种无创伤的影像检查手段,临床诊断子宫内膜异位症的敏感性和准确性都很高[2]。动物核磁共振技术,是目前新兴的药理研究方法[3]。它利用MRI技术在药理模型动物上进行非致死性连续观察,具有活体、无创伤等优点,较传统的药理实验方法有独特的优势,可以动态地监测动物模型的发展及药物持续疗效。国内尚无采用磁共振观察大鼠EMs模型的报道,本研究采用自体子宫内膜移植法制作大鼠EMs模型并使用1.5T MRI对异位病灶进行观察,分析异位病灶的磁共振表现特点,建立大鼠子宫内膜异位症模型的影像学研究方法。
1材料
1.1试剂与仪器戊巴比妥钠(美国Sigma公司,批号018k0754);马根维显(广州先灵药业有限公司,批号052A11);雌二醇(天津金耀氨基酸有限公司,批号1005051)。磁共振仪(美国GE Echospeed 1.5T),GE AW 4.3工作站。
1.2动物健康雌性SD大鼠10只,清洁级,体重250~300 g,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司,动物质量合格证号SCXK(沪)2007-0005,大鼠合格证号2007000515645。
2方法
2.1动物模型制作[4]10只SD大鼠用3%戊巴比妥钠行腹腔注射麻醉,备皮、消毒,下腹部正中切口,逐层打开腹壁。找到左侧子宫,切取子宫组织。将切下的子宫组织放在盛有生理盐水的培养皿中,纵行解剖开子宫段,剪取5 mm×5 mm的子宫内膜组织。令其内膜面贴于左侧腹壁,用缝合线将四角与左侧腹壁肌肉缝合,逐层缝合切口。术后连续3 d注射青霉素16万U,正常喂养。术后第2天开始肌注雌二醇0.1 mg·kg-1·d-1,每隔4 d 1次,共3次。
2.2整体观察造模大鼠种植后第21,28天分别用3%的戊巴比妥麻醉,麻醉后固定大鼠于超净工作台上,腹部剃毛,皮肤常规消毒,下腹部正中切口,逐层打开腹腔,观察模型大鼠的异位病灶形态学变化。
2.3磁共振检查方法[5] 使用GE Excite Echospeed HD 1.5T 超导磁共振成像设备,3英寸表面线圈检查。冠状面定位,常规行横断面T1WI,T2WI和弥散成像(DWI)扫描,层厚3 mm,间隔0.2 mm,FOV 10 cm×10 cm,矩阵224×192,2NEX。T1WI:SE序列,TR/TE=550 ms/24 ms。T2WI:FSE序列,TR/TE=2 920 ms/88 ms。DWI:SE/EPI,TR/TE:4 000/71.6,矩阵64×96,8NEX,梯度因子(b)为500。增强扫描采用:SE序列,TR/TE=600 ms/27 ms。横断面T2×PWI检查:单次激发GRE-EPI序列,TR/TE=1 500 ms/35 ms, FA=90°,层厚3 mm,间隔0.2 mm, FOV 10 cm×10 cm,矩阵64×64,1NEX。每选定层面获取30幅基本图像后注入0.3 mmol·kg-1马根维显,共获取100幅图像,成像时间150 s。T1增强:横断面T2×PWI检查后立即磁共振T1成像。
2.4磁共振影像分析[5-6]异位病灶信号强度计算:在大鼠的T1WI,T2WI,DWI,CE-T1WI图上,选取含异位病灶最明显、连续的2~3个层面。在GE后处理工作站AW 4.3上,手动画出异位病灶与周围正常肌肉,自动获得信号强度(signal intensity,SI),分别计算所选病灶与肌肉的信号强度平均值,代表病灶与肌肉的SI。
异位病灶体积计算:在大鼠的磁共振图像上,选取含异位病灶显示最明显、连续的2~3个层面。在GE后处理工作站AW 4.3上,手动画出异位病灶范围,可得病灶面积,通过公式计算为每层病灶面积×(层厚+层间隔)。
2.5病理学检查将取出的大鼠异位内膜包块和正常大鼠子宫置于10%甲醛溶液中固定,常规石蜡包埋,4 μm厚度连续切片,HE染色,光学显微镜下观察异位内膜及正常子宫内膜的组织形态学特点及差异。
3结果
3.1整体观察左侧腹壁的移植物成囊状,生长良好,体积增大,呈隆起暗红色的或透亮的小囊泡,壁薄,内部充满清亮积液,囊泡高度≥2 mm,造模成功,见图1。右侧腹壁光滑,无任何移植物生长。
3.2MRI表现图2显示了种植后第16,23,30天的异位病灶MRI扫描图像(箭头处表示异位病灶)。种植后第16天异位灶在DWI图像上呈亮高信号(A),T1WI图像上呈均匀低信号(B),T2WI图像上呈高信号,信号均匀,边界清楚(C)。种植后第23天异位灶在DWI图像上呈亮高信号(D),T1WI图像上呈均匀低信号(E),T2WI图像上呈高信号,信号均匀,边界清楚(F),在CE-T1WI图像上异位灶周围一圈轮廓增强,中心信号无增强(G)。种植后第30天的异位病灶MRI扫描图像。异位灶在DWI图像上呈亮高信号(H),T1WI图像上呈均匀低信号(I),T2WI图像上呈高信号,信号均匀,边界清楚(J)。具体各序列信号强度结果见表1。
3.3异位病灶体积造模后,左侧腹壁的异位组织随种植时间延长体积明显增大,第16天体积为(171.92±38.91) mm3,第23天体积达到最大,为(262.95±43.56) mm3,第30天体积为(143.72±51.22) mm3,而右侧腹壁无任何异常。
3.4病理观察显微镜下可见正常子宫内膜衬覆单层柱状上皮,子宫间质及平滑肌细胞无明显异常;异位灶成囊状,囊壁由上皮细胞细胞层、间质细胞层、肌层等组成,上皮细胞层以柱状上皮或立方状细胞形成锯齿状生长。上皮细胞层下可见疏松的间质细胞,间质内含血管及腺体,腺上皮细胞为柱状或立方状,见图3。
4讨论
建立理想的EMs动物模型在内异症的发病机制、治疗新药的研究中具有重要的作用,手术移植法是目前建立EMs动物模型的主要方法,常用的手术造模方法为将大鼠自体子宫内膜种植到子宫腔以外的地方,如缝合于卵巢周围、子宫旁韧带或肠系膜等部位[7-8]。本研究将自体子宫内膜组织种植于大鼠左侧腹壁制作EMs动物模型,术后3周开腹可见种植物呈隆起暗红色的或透亮囊泡,内部有积液,体积增大,与病理结果对照,表明造模成功。该方法简便易行,易于观察和取材,并且腹壁光滑,无大血管,因此手术过程中无明显出血,动物死亡率低。为研究子宫内膜异位症的发病机制与治疗策略提供了一种简便的模型复制方法。
本研究结合了动物磁共振成像技术,为大鼠EMs模型建立了整体评价手段。作者将自体子宫内膜组织种植于大鼠左侧腹壁,右侧腹壁没有移植,目的是在核磁影像上用右侧腹壁作为自身对照,较之另设假手术对照组,影像学上采用自身对照更便于观察和区分。MRI图像和影像分析表明,磁共振影像上DWI和T2加权图像异位病灶成像清晰,定位准确;CE-T1WI增强图像异位病灶内部未见增强,提示造影剂无法进入,说明异位病灶内部无血管,这与整体观察发现种植物内有液体积聚的结果一致。
中药治疗子宫内膜异位症的作用具有多水平、多靶点的特点,然而目前对中药疗效的观察和评价通常缺乏科学有效的标准和客观的评价指标,因此采用客观药理研究方法是提高中药研究的关键。以往的药理实验方法多通过打开动物腹腔,观察异位病灶生长情况,测量异位病灶的直径、体积作为造模成功和内异症药物药效学评价的定量指标。磁共振技术作为无创检查手段可直接在影像上观察到异位灶的发生发展,避免了动物多次开腹,便于长期反复实验及用药后连续性观察,为后续的中药治疗提供了客观、有效的诊断方法和评价指标,促进了中医药在子宫内膜异位症治疗上的发展。
[参考文献]
[1]乐杰. 妇产科学[M]. 6版. 北京:人民卫生出版社,2005:354.
[2]刘波,魏光师,霍敏中,等. 子宫内膜异位症的MRI影像病理学研究[J]. 现代临床医学生物工程学杂志,2002,8(2):116.
[3]Inbar Elron-Gross, Yifat Glucksam, Inbal E Biton, et al. A novel diclofenac-carrier for local treatment of osteoarthritis applying live-animal MRI [J]. J Controlled Release, 2009, 135(1): 65.
[4]杨萍,纳冬荃,熊亚龙,等. 大鼠子宫内膜异位模型的建立与组织学观察[J]. 中国实验动物学报, 2006, 14(2): 139.
[5]姚楠,张健,黄德健,等. 磁共振成像技术评价考布他汀A4磷酸酯对大鼠移植性肝脏肿瘤的治疗作用[J]. 中国药科大学学报,2010,41(6):558.
[6]张健,孙胜禄,孔铭,等. 大鼠部分肝脏缺血再灌坏死模型的优化及磁共振评价方法[J]. 药物生物技术,2010,17(3):228.
[7]王凤英,王树林. 克痛胶囊治疗子宫内膜异位症的实验研究[J]. 中国妇幼保健,2008,23(19):2745.
[8]郑澄宇,杨冬梓,谢梅青,等. 大鼠子宫内膜异位症模型的建立及其组织学观察[J]. 中山医科大学学报,2001,22(2):106.
Magnetic resonance characteristics of endometriosis rat model
WANG Pei-juan1, YAO Nan1, HUANG De-jian1, ZHANG Jian1, NI Yi-cheng2*
(1.Jiangsu Province Academy of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210028, China; 2.University of Leuven, Leuven 3000, Belgium)
[Abstract]Objective: To establish a non-invasive, repeatable and dynamic study method in endometriosis rat model using magnetic resonance imaging (MRI), in order to explore the magnetic resonance characteristics of the model. Method: Endometrium tissues were transplanted into left abdominal walls of unmated adult female SD rats. After surgery, pathological changes were observed and MRI scanning was made for the ectopic lesions. Result: The endometriosis rat model was successfully established and the ectopic lesions imaged strong hyperintense on DWI, hypointense on T1WI, hyperintense on T2WI with a clear border, without enhancement on CE-T1WI. Conclusion: The lesions can be clearly observed in the MRI images on the endometriosis rat model established by this method, which facilitates repeat experiments and continuous observation studies.
[Key words]endometriosis model; magnetic resonance imaging (MRI)
doi:10.4268/cjcmm20122025
[责任编辑张宁宁]
(责任编辑:单位文秘网) )地址:https://www.kgf8887.com/show-159-63619-1.html
上一篇:基于贝叶斯公式的保费的确立
版权声明:
本站由单位文秘网原创策划制作,欢迎订阅或转载,但请注明出处。违者必究。单位文秘网独家运营 版权所有 未经许可不得转载使用