单位文秘网 2021-08-10 08:14:13 点击: 次
摘要: 目的:制备微生物定量质控样品,并对样本的稳定与均匀性进行检测分析,判断是否符合日常工作室内质控的要求。方法:将一定浓度的甘油-营养肉汤菌悬液快速冻存于液氮中。对短期内冻存样品连续随机抽取10个样,进行菌落总数的检测。应用单因素方差分析法对检测结果进行统计分析。结果:以α=0.05为检验水准,该质控样样品间无显著性差异(P=0.159)。结论: 样品短期内具均匀性和一定稳定性。该质控样品,可对微生物实验室定量检测的短期质控提供一定的帮助
关键词:: 均匀性;质量控制;微生物
【中图分类号】R155【文献标识码】A【文章编号】1672-8602(2014)02-0017-02
在微生物学定量检验领域,由于其检验对象的特性,日常工作的过程质控,因缺乏高可信度、价格优廉的标准物质,往往只能通过培养基、培养温度、培养时间等的检查来确定检验过程的可控性,但有时人员或其它因素变化可给检测结果带来一定的随意性和不确定性。同时或因不能及时发现过程失控而忽略,或因对检测过程怀疑而使结果的可信度降低,从而无法保证检测质量。因此,制备达到一定均匀性与稳定性的微生物定量质控样品,可促进日常工作的检测过程质量控制。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1样品:实验室自备样品,为含一定量菌落数的甘油-脑心浸出液。冻干菌株:金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003(来源:中国食品药品检定研究院)。
1.1.2 主要仪器与试剂:(1)主要仪器:BLON-08型均质器,立式高压灭菌锅,DHP-9160恒温培养箱,BHC-1300IIA2生物安全柜、YDS-30-125液氮罐。(2)主要试剂:甘油、氯化钠(均为广东汕头化工厂生产),营养肉汤、平板计数琼脂培养基、脑心浸出液(均为北京陆桥技术有限责任公司生产);所有试剂按其相应要求制备与灭菌,均在有效期内使用。
2.2方法
2.2.1样品制备: 取冻干菌株,按要求加入一定量营养肉汤在(36.0±0.5)℃(24±2)小时复苏。分别取复苏液1ml加入60ml营养肉汤中,(36.0±0.5)℃(24±2)小时。分别取该培养液按GB4789.2-20l0菌落总数[1]检验其所含菌落数,同时该培养液置于4℃冰箱中。之后将该培养液用4℃的甘油-营养肉汤稀释至含菌落为6000~10000CFU/ml的菌悬液,将该菌悬液分装于冻存管中,2.2ml/管,作为冻存样品。快速依次置于液氮气层、液氮中冻存。
2.2.2操作步骤:菌落总数:对冻存的样品每日随机抽取1个样品进行检测、共10个[2]。样品取用时,将冻存管快速置于37℃温水中,1分钟内快速解冻。无菌条件下将样品开启、取样,每份样品进行平行试验。所有测试均应在可重复条件下进行。对所取样品,分成2份,并进行3个系列的10倍倍比稀释,混合均匀,按4789.2-2010操作,分别吸取各稀释液1mL到2个平皿中,倾入保温为45℃的平板计数琼脂,混匀,待培养基凝固后倒置放于36℃恒温培养箱中48h培养,取出平板进行菌落计数。同时分别以稀释液和培养基做空白对照。
2.2.3均匀性检验:可以通过检验各样本均值是否具有统计学意义上的差异来判断制备样品的均匀性,常采用单因素方差分析法、t检验法、极差检验法等统计学方法[3-4]。对生物类样品可采用单因素方差分析 (one-way ANOVA)来进行样品均匀性的统计分析判断[4]。单因素方差分析(one-way ANOVA)又称为一维方差分析,研究单个因素对观测变量的影响,对由单一因素影响的一个(或几个相互独立的)因变量由因素各水平分组的均值之间的差异进行检验,判断是否具有统计意义。因此,若各分组间存在统计学差异,说明该因素(分类变量)对因变量存在显著影响。 计算公式见表1。
3结果
单因素方差分析结果见表2。检测结果见表3,
4讨论
为适应随着人民生活水平的提高及技术水平的发展,相关产品细菌学指标检测标准或方法不断得到提高与完善,由此对微生物实验室的检测质量控制提出的要求也越来越严谨与细致[5]。目前,为确保实验室检测能力与质量控制,主要途径是除了定期参加相关项目的实验室能力验证外,在细菌学指标检测的日常工作中,需要对培养基进行适应性与对照菌株的生长能力检查,实验过程带入阳性对照、空白对照或阴性对照,对实验环境的洁净程度进行定期监测与控制,对其它实验条件如温度、时间等进行控制,同时不断加强技术人员的专业技能培训[5-9]。若是能在日常工作中的定量检测实验过程带入定量质控样品,则可以从另一个方面反映实验室的检测质量,尤其在实验条件发生改变而又未能及时发现时可以发出警示,同时对不同检测技术人员的检测过程起到一个平行对照的作用,也有助于评定实验室的不确定度。其不随检测人员、日常检测样品等的改变而受到影响。目前已出现商品化的定量质控样品,也有获得国家批准成为标准物质的,但作为日常工作的质控样品,需要考虑到成本因素。因此,制备实验室日常工作质控样品,具有重要的意义。
通过随机抽样,采用单因素方差分析法对短期保存的10个样本进行统计分析,样品内和样品间均无显著性差异,由此可初步说明该样本是均匀的。要注意的是在检测前对所用培养基进行适应性检查,所用菌株具有良好的活性;检测过程中取样量需准确、取样方式、测定方法具备一定的平行性,防止各稀释度交叉污染等。此次样本为单一菌株是日常工作定量质控的初步探索。作为菌落总数检验的过程质控,混合菌株的质控样更具代表性。但由于不同细菌的特性不同,在相同培养基与培养条件下的生长情况体现差异,在混合生长时可能存在一定的相互作用或影响及其程度的大小[10]、在保存及定量检测时是否能够表现出一定规律尚不能完全确定,对样本的均匀性产生一定的影响,而混合多少种菌株作为质控品,对菌落总数指标才具代表意义,尚需要不断摸索、改进与完善。
参考文献
[1]GB 4789.2-2010菌落总数检验[S].
[2]ISO/TS 22117:2010 Microbiology of food and animal feeding stuffs-Specific requirements and guidance for proficiency testing by interlaboratory comparison[S].
[3]CNAS-GL03:2006能力验证样品均匀性和稳定性评价指南[S].
[4]金献忠,郑曙昭,丘寅.能力验证样品均匀性和稳定性检验的统计方法[J].现代测量与实验室管理,2003,04:35-36.
[5]GB 4789.1-2010食品微生物学检验 总则[S].
[6]GB 4789.28-2013食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求[S].
[7]国家药典委员会.中国药典(2010年版)[M].北京:中国医药科技出版社,2010.
[8]刘锐萍,王峰,刘珊珊,等.食品、药品微生物检测实验室质量控制方法分析[J].中国微生态学杂志,2013,25(7):847-850.
[9]王宏明.微生物检验技术操作规程与质量控制及检测数据分析处理实用手册[M].北京: 卫生科技出版社,2007.
[10]吉彦莉,郭勇峰,王敬辉,等. CNCA-12-A01食品微生物学能力验证结果分析[J].公共卫生与预防医学,2013,24(4):100-101.
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