单位文秘网 2021-08-10 08:13:44 点击: 次
摘要 试验通过采集临床症状疑似猪链球菌感染的猪内脏器官进行涂片染色镜检、分离纯化、生化试验,结果确诊该分离菌为猪链球菌。进行药物敏感性试验,结果发现其对菌必治、庆大霉素、氟哌酸、妥布霉素、氧氟沙星、环丙沙星等药物敏感,并且对小白鼠表现出较强的致病力。
关键词 猪链球菌;分离;鉴定
中图分类号 S858.28 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2015)10-0261-02
猪链球菌病是一种危害养猪业的传染病,由链球菌感染引起,常给养猪业造成巨大损失,并可引起从业人员感染致死[1]。猪链球菌病分布范围广,在世界各地均有发生[2]。自20世纪50年代初期证实以来,荷兰、英国、美国等世界许多国家先后报道了猪链球菌病[3]。近几年,我国除西藏等少数地区尚未发现本病外,猪链球菌病在大多数省、市、自治区均有不同程度的发生与流行。总而言之,猪链球菌病的发生和危害在我国呈日趋严重态势[4]。现阶段,从病原学着手研究猪链球菌病,有助于了解猪链球菌的发生规律、病原特性,有助于提出防治措施,以更好地控制该病。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验病料为陕西某猪场送检的疑似猪链球菌病猪肝脏、脾脏。试验动物为小白鼠(购于陕西省西安市第四军医大学)。
1.2 培养基
普通营养肉汤、普通营养琼脂平板、鲜血琼脂平板、麦康凯琼脂平板,各种糖发酵管等按参考文献[5]制备。
1.3 试验试剂与染液
革兰氏染色液,邓亨氏蛋白胨水,M-R试剂、V-P试剂,3% H2O2溶液,吲哚试验试剂等生化试验用培养基,药敏纸片(20140114,购于上海伊华医学科技有限公司)。
1.4 试验方法
1.4.1 涂片染色镜检。用消毒的剪刀和镊子无菌操作采取病料深部组织涂片,革兰氏染色后镜检。
1.4.2 细菌分离培养。无菌采取发病仔猪肝脏,接种普通肉汤及稀释增菌后的肉汤,分别进行需氧培养和厌氧培养。37 ℃下培养24 h后,针对不同形态的菌落,分别接种普通平板、鲜血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、普通肉汤,37 ℃温箱培养24 h,观察生长表现,并对菌落进行革兰氏染色,分别观察形态特征。直到获得纯培养物,置4 ℃冰箱保存备用。
1.4.3 生化试验。按文献[6]介绍的方法,将分离菌纯培养物进行糖发酵试验。
1.4.4 药敏试验。用无菌棉签蘸取菌液均匀涂在普通平板上,贴上药敏纸片,37 ℃条件下培养24 h,以抑菌环的大小判定结果[5]。
1.4.5 动物致病性试验。分2组,即处理组和对照组。处理组用37 ℃、24 h肉汤培养物注射20~25 g小白鼠,腹腔注射0.3 mL/只;对照组注射生理盐水0.3 mL/只。每组5只,观察发病情况。
2 结果与分析
2.1 分离菌鉴定结果
2.1.1 镜检结果。革兰氏染色的涂片上可见到革兰氏阳性链状球菌。
2.1.2 细菌在平板上生长情况。鲜血琼脂平板:生长良好,圆形、半透明针尖大小菌落,边缘整齐,凸起,表面光滑,明显的α溶血。普通琼脂平板和麦康凯琼脂平板上不生长。
2.2 细菌生化试验结果
生化试验结果如表1所示。根据镜检结果、培养生长特性以及各种生化试验的结果,参考《兽医微生物学(第五版)》《常见细菌系统鉴定手册》等书籍基本判定,分离菌判定为猪链球菌。
2.3 药物敏感性试验结果
药物敏感性试验结果如表2所示。此分离链球菌敏感的药物有菌必治、庆大霉素、氟哌酸、妥布霉素、氧氟沙星、环丙沙星。
2.4 动物致病性试验结果
5只小白鼠腹腔注射24 h后均死亡,对照组全部成活,剖检可见小白鼠心脏有暗黑色血凝块,腹腔有胶胨样渗出,肝脏呈暗红色。从死亡感染小白鼠体内可重新分离到感染菌。
3 结论与讨论
本次试验通过对疑似猪链球菌感染病例作了细菌的分离培养、生化试验、药敏试验以及动物致病性试验,分离到一株致病性细菌为猪链球菌。近年来,猪链球菌病不断发生,尤其是急性败血型和急性脑膜炎型频繁的暴发,其发病急、死亡快,给养猪行业带来了较大的经济损失[7]。虽然临床检验中用病变脏器涂片镜检,可以得出初步的诊断,但要最终确诊,则需要进行实验室的诊断。提供准确的实验室诊断结果,对从病原上进行针对性治疗是十分重要的。
对于链球菌病的防治,一是提高猪只营养水平,增强机体的非特异性免疫功能;二是加强饲养管理,对猪舍通风换气;三是保持猪舍清洁,注意饮水清洁卫生。发现疾病,分离致病菌并做药敏试验,选取敏感药物用于及时治疗。
4 参考文献
[1] 吴静,贾桂珍.猪链球菌病病原的分离鉴定及药敏试验[J].江苏农业科学,2011,39(6):349-351.
[2] 陆承平.兽医微生物学[M].5版.北京:中国农业出版社,2014:12 .
[3] 卿泰安.湖南省猪链球菌的分离鉴定与药敏试验[J].动物医学进展,2007,28(5):16-19.
[4] 王海丽,赵德明,葛长城,等.猪链球菌病的分离鉴定及其生物学特性试验[J].中国兽医杂志,2012,48(7):36-38.
[5] 李健强,李六金.兽医微生物学实验实习指[M].西安:陕西科学技术出版社,1999:8.
[6] 姚火春.兽医微生物学实验指导[M].北京:中国农业出版社,2002.
[7] 曲祖乙,史丽华.猪链球菌的分离与鉴定[J].现代畜牧兽医,2007(12):37-38.
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