单位文秘网 2021-07-10 08:15:43 点击: 次
组织,利用骨骼肌细胞体外研究胰岛素抵抗具有重要意义,而Rut对骨骼肌胰岛素抵抗情况及葡萄糖消耗是怎样的呢?其可能的机制是什么?国内外未见相关报道。因此,本实验先培养原代骨骼肌细胞,并将之诱导成胰岛素抵抗原代骨骼肌细胞(insulin resistant primary skeletal muscle cells,IR-PSMC),用Rut对IR-PSMC细胞进行干预,观察药物对IL-1,IL-6,TNF-α 等炎症因子的影响,进而探讨Rut对IR-PSMC细胞炎症影响是否具有直接作用及其改善胰岛素抵抗可能的机制。
1 材料
1.1 动物
3 d 龄SD大鼠,SPF级,雌雄不拘,5只,由上海B&K实验动物有限公司提供,许可证号SYXK (沪) 2008-0016,本实验用动物获得上海中医药大学动物伦理委员会同意。
1.2 仪器
TRUE-100纯水仪(上海菲特科学器材有限公司,序列号081230-62),CO2细胞培养箱(HEPA CLASS 100,美国Thermo公司),倒置相差显微镜 (IX 71,Olympus,日本),HWS26型电热恒温水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司),SIM-F140AY65 SANYO制冰机(日本三洋),METTLER TOLEDO MS105型电子精密天平(梅特勒-拖利多仪器(上海)有限公司),Eppendorf 5811 R 低温高速离心机(Eppendorf Co.,编号0038606,德国),-80 ℃ 超低温冰箱(Forma-86C, 美国Thermo公司),200目、400目不锈钢筛网,外科剪,眼科镊等(上海青阳生物科技有限公司)。
1.3 试剂
Rut(纯度≥98%,上海同田生物制剂有限公司,上海),戊巴比妥钠(上海杰祥生物有限公司,上海),青霉素-链霉素(碧云天生物技术研究所,江苏),DMEM培养基(高糖,GIBCO),F-10 培养基(N6908,Sigma),胎牛血清,NaHCO3,DMSO,NaOH,NaCl等(中国医药集团上海化学试剂公司,上海),葡萄糖氧化酶法-过氧化物酶法测定试剂盒(GOD-POD)(上海荣盛生物药业有限公司,上海),IL-1,IL-6,TNF-α ELISA 试剂盒(R&D,美国)。
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