单位文秘网 2021-07-09 08:17:50 点击: 次
[摘要] 目的 评价大蒜素与头孢哌酮联合用药对临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-ABA)体外抗菌活性。 方法 采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定不同浓度组合的2组抗菌药物,分别对15株敏感ABA和15株耐头孢哌酮ABA的最低抑菌浓度,并计算FIC指数判定联合效应。 结果 大蒜素与头孢哌酮联合应用后,其MIC50显著降低;FIC指数分布: FIC≤0.5占40.8%~65.1%;0.5
[关键词] 大蒜素;头孢哌酮;鲍曼不动杆菌; FIC index
[中图分类号] R446.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2013)21-0068-02
鲍曼不动杆菌(ABA)是目前医院感染主要致病菌之一。研究表明,近几年来其耐药性迅速增长[1],甚至出现了只对多黏菌素敏感而其他抗生素均耐药的菌株[2],近年来鲍曼不动杆菌的耐药问题逐渐成为学者们关注的焦点。这种日趋严重的耐药现象迫使我们急需一种新的抗菌药物或联合用药来控制和减少耐药菌株产生。大蒜素(allicin)是大蒜的主要成分,有抗菌、消炎及抗病原微生物、抗肿瘤等多种药理作用[3],临床已将其广泛应用于抗感染的治疗。本文在文献研究的基础上通过对大蒜素联合头孢哌酮对多重耐药鲍曼不动杆菌的杀伤效果进行了观察,以期为临床上泛耐药的鲍曼不动杆菌的治疗提供新的视点。
1 材料与方法
1.1 分离菌株
30菌株临床分离的ABA,均经VITEKCompact细菌鉴定仪鉴定,其中包括15株敏感ABA和15株耐头孢哌酮ABA,排除同一患者同一部位的重复菌株。质控菌为大肠埃希菌ATCC 25922。
1.2 抗菌药物
大蒜素,批号:H32025640,江苏正大天晴药业股份有限公司;头孢哌酮钠,批号130420-200304,含量96.5%,中国药品生物制品检定所。
1.3 培养基与药敏纸片
K-B法检测临床常用药物敏感试验药敏试验方法采用微量肉汤稀释法。药敏纸片均为英国Oxoid公司生产。根据2009年美国临床实验室标准化研究所(CLSI)规定的判断标准判定菌株对抗菌药物的敏感性。
1.4仪器
微量加样器和微量离心管由Eppendorf 中国有限公司生产;恒温培养箱由Thermo公司生产;比浊仪,VITEK全自动细菌鉴定仪和哥伦比亚血琼脂均由法国生物梅里埃公司生产。
1.5 方法
1.5.1 菌悬液的配制 挑取4~5个已分纯的菌落,接种于肉汤中增菌,6 h后取3 mL菌液通过比浊仪校正其浊度至0.5 MacFarland,然后再用M-H肉汤稀释至1.5×105 CFU/mL。
1.5.2 微量肉汤稀释法 将大蒜素和头孢哌酮的药物浓度依次倍比稀释,设置11个稀释浓度。按棋盘法设计, 将不同浓度的大蒜素与抗菌药物两两组合后取50μL加入96孔平板中,再将1.5×105 CFU/mL的菌液100μL加入孔中,37 ℃培养过夜。记录MIC值,计算(部分抑菌浓度指数)FIC指数,FIC指数=MIC甲药联用/MIC甲药单用+MIC乙药联用/MIC乙药单用。
1.5.3判读标准[4] FIC指数≤0.5时,两种药为协同作用;FIC指数为0.5~1.0,两种药为相加作用; l.0
2 结果
2.1 药敏率
大蒜素与头孢哌酮联合应用后,其MIC50和MIC90显著降低。见表1。
表1 大蒜素与头孢哌酮联用对敏感和耐药鲍曼不动杆菌MIC(mg/L)
2.2 FIC指数分布
大蒜素与头孢哌酮联用对鲍曼不动杆菌的FIC指数分布构成比, 结果显示,FIC指数分布:FIC指数≤0.5占40.8%~65.1%;0.5
图1 大蒜素与头孢哌酮联用对鲍曼不动杆菌的FIC指数分布构成比
3 讨论
ABA广泛分布于自然界和医院环境中,是引起严重致死性院内感染的重要病原菌[5]。由于近年来抗生素的大量使用或滥用,导致多重耐药甚至泛耐药ABA的大量出现,已成为临床治疗面临的严峻挑战,引起了医学界高度重视[6]。从我国国家细菌耐药性监测中心可以了解到[7],2004~2005年与2009年ABA对亚胺培南敏感率由65.1%下降至60.6%,对美罗培南敏感率由56.8%下降至55.5%,截止2009年全国12所医院(MDR-ABA)已经达到47.7%。因此,在缺乏安全有效的单一抗菌药物治疗之前,联合用药成为控制和减少耐药菌株产生的有效手段[8]。
大蒜素是一种天然抗菌药物, 常被作为食疗及中药治病。具有一定的抑制病原菌和真菌的作用,生物学性能良好,刺激性小,无毒副作用,无抗原性,挥发性大[9]。现代研究表明,抗菌机制可能是由于其参与了氧化应激参反应,且大蒜中含有蒜酶、过氧化物酶、磷酸醋酶以及一些水解酶,对细菌有氧化和水解作用[10-12]。大蒜素还能特异性地抑制其他细菌的酶,如醋酸激酶和磷酸转乙酰-辅酶A合成酶[3]。
最低抑菌浓度指药物抑制细胞生长所需要的最低浓度,是测量抗菌药物抗菌活性大小的一个指标,最低抑菌浓度的大小与细菌对抗菌药物的敏感度高低呈负相关,即最低抑菌浓度值越小,细菌对该抗菌药物的敏感度越高,一般用MIC50及MIC90值评价抗菌效果。
大蒜素是蒜氨酸经蒜酶裂解后生成并发挥活性作用[13],具有广谱抗菌的活性。既往研究表明[13~15],大蒜素对大肠杆菌,沙门菌,金黄色葡萄球菌链球菌,克雷伯菌,变形杆菌,芽孢杆菌等均有抗菌作用,但其对ABA尤其是MDR-ABA是否具有抗菌活性,目前尚未见文献报道。通过本研究我们发现,大蒜素与头孢哌酮联用后,能显著降低头孢哌酮的MIC值,尤其是MDR-ABA,能够使其MIC值降到临床推荐使用剂量之内。大蒜素作为植物性天然广谱抗生素,可以作为感染性疾病治疗中的一种首要的候选药物,是一种值得在临床推广使用的新型药物,但对其在体内ABA的作用机制有待进一步研究。
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(收稿日期:2013-05-14)
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